1. A. 科学背景
   1. 关键qPCR参数
   2. 原始数据如何转化为结果
2. B. LSM 配置（一次性设置）
   1. 创建原始数据参数
   2. 添加参数的短语值
   3. 创建井解释参数
   4. 将解释参数扩展到重复项（可选）
   5. 构建测试，添加参数并定义原始数据的标准
3. C. 日常工作流程（执行）
   1. 创建作业并开始分析
   2. 将样品接种到培养皿中并生成样品清单（Tube Sorter)
   3. 运行 qPCR 实验
   4. 将结果导入 LSM（解析器）
   5. 审核并完成工作

在 qPCR 或 RT-qPCR 检测中，每个孔都会产生三个主要参数：

• Ct/Cq — 荧光强度超过阈值的周期
• 雪道 — 反映放大效率
• EPF（终点荧光） — 最终荧光强度

必须使用实验室验证的临界值来解读这些结果。典型解读依据建议：

在一口井中，每个参数都有其对应的解释：

• 积极的
• 不确定
• 负

这三种解释的结合决定了该油井的最终决定，而该油井将具有相同的价值选择权。

为确保可靠性和一致性，您的实验室应包括：

• 阳性对照
• 阴性对照
• 理想情况下，复制品

在定义 qPCR 检测之前，您需要创建参数。这里我们将描述一个每个样本在两个孔中进行重复检测的场景。

您至少应该创建 6 个数值参数。这些参数将保存从 PCR 仪器解析出的原始值。

• Ct – 1，Ct – 2
• 坡度 1，坡度 2
• EPF – 1，EPF – 2

针对每个参数，创建 LSM 在评估每个数值参数后将分配的三个定性结果：

• 积极的
• 不确定
• 负

这些短语将与标准一起用于测试，并在之后的最终油井解释规则中使用。

现在我们需要将这三个参数的短语结合起来，以确定最终的井位解释。典型的解释结构反映了标准的qPCR决策逻辑：

• 如果三个结果均为正数 → 最终结果 = 正数
• 如果任何参数不确定且没有负值 → 最终结果 = 不确定
• 如果任何参数为负值 → 最终结果 = 负值

在LSM中，我们建议使用评分系统，以便在参数不一致时实现稳定的自动决策，并减少极端情况下的歧义。具体做法是为每个短语分配数值分数：

• 正数 = 4
• 不确定度 = 3
• 负数 = 1

在您的 LSM 中，这意味着创建两个计算字段——每个重复样本一个。公式将使用原始参数的短语和计算参数类型的条件特征。请务必再次添加短语，以便获得井的定性结果。

测试的所有组件都已创建完毕，现在可以开始设置测试了。

您可以先进行一些常规的测试设置，例如样本类型、标准、操作员等……

完成后，您需要向测试中添加参数。对于每个参数：

1. 添加参数
2. 定义阈值并分配短语

在LSM插件中，转到“作业”选项卡，然后选择“添加作业”。您可以在这里提前下单运行qPCR实验。

作业创建完成后，请务必通过设置齿轮图标 > 管理 > 启动参数来启动它。在此选项卡中，您可以验证要应用的条件和/或定义何时收到样品。

使用 Tube Sorter 此外，您还将能够：

• 将样品映射到孔板孔中（试管分发或 96 孔到 96 孔板映射工具）

• 生成与您的 qPCR 仪器兼容的 PCR 清单文件（生成样本清单工具）

• 请盛好您的餐盘
• 运行 qPCR 程序
• 导出仪器的结果文件（通常为 CSV、TXT 或系统特定格式）

这里有两种选择，要么通过解析器插件自动整合结果，要么手动整合值。

在解析器插件中：

1. 点击文件夹或直接拖放文件

在 LSM 插件中：

2. 您有结果的未完成工作、测试、样品或批次
3. 手动填写数值

• 检查标记为“不确定”或“阴性”的样品，以发现潜在问题。
• 批准最终结果
• 在 LSM 中完成这项工作

您的 qPCR 运行记录现已完整保存并可追溯。 LabCollector!